基因擴增儀的工作原理是什么？

發(fā)布時間：2022-07-01

　　基因擴增儀的工作原理　　基因擴增儀是利用PCR技術(shù)對特定基因做體外的大量合成，用于以檢測DNA/RNA為目的的各種基因分析。　　基因擴增儀的PCR反應一般設(shè)置20~40次循環(huán)，每一循環(huán)包括高溫變性、低溫退火、中溫延伸三步反應。每一循環(huán)的產(chǎn)物作為下一個循環(huán)的模板。PCR的擴增效率很高，如果循環(huán)次數(shù)是30次，那么新生DNA 片段理論上達到230拷貝（約為109個分子）。PCR反應每個循環(huán)的三個基本反應步驟如下：　　① 模板DNA的變性：模板DNA經(jīng)加熱至94℃左右一定時間后，使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴增形成的雙鏈DNA產(chǎn)物解離，使之成為單鏈，以便它與引物結(jié)合，為下輪反應作準備；　　② 模板DNA與引物的退火（復性）：模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后，溫度降至55℃左右，引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結(jié)合；　?、?引物的延伸：溫度升到72℃左右，DNA模板-引物結(jié)合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP為反應原料，靶序列為模板，按堿基配對與半保留復制原理，合成一條新的與模板DNA鏈互補的半保留復制鏈。重復循環(huán)變性-退火-延伸三過程，就可獲得更多的“半保留復制鏈”，而且這種新鏈又可成

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