凝膠成像系統(tǒng)的介紹

凝膠成像系統(tǒng)是用不同染色(如EB、考馬斯亮藍(lán)、銀染、sybr綠)和非化學(xué)發(fā)光成像(如微孔板和平板)對DNA/RNA/蛋白質(zhì)凝膠電泳進(jìn)行檢測和分析。凝膠成像系統(tǒng)可用于常規(guī)生物工程研究，如分子量計(jì)算、密度掃描、密度定量和聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的分析定量工作。 樣品在電泳凝膠或其他載體上的遷移率不同，因此與標(biāo)準(zhǔn)品或其他替代標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行比較將對未知樣品進(jìn)行定性分析。這是圖像分析系統(tǒng)的定性基礎(chǔ)。未知樣品可以根據(jù)其在地圖中的位置進(jìn)行定性分析，根據(jù)未知樣本在凝膠中的遷移率并輔助marker來對未知樣本進(jìn)行分子量大小標(biāo)定，鑒別目的產(chǎn)物等確定成分和性質(zhì)的定性分析工作。 樣品部分吸收投射光或反射光，因此樣品條在通過攝影獲得的圖像上的光密度會不同。光密度與樣品的濃度或質(zhì)量成線性關(guān)系。根據(jù)未知樣品的光密度，通過與已知濃度的樣品條的光密度進(jìn)行比較，可以得到未知樣品的濃度或質(zhì)量。這是圖像分析系統(tǒng)的定量基礎(chǔ)。采用新的紫外透射光源和透射光源技術(shù)，使光線分布更加均勻，大限度解決光密度不均勻的影響。 一般來說，凝膠成像系統(tǒng)可應(yīng)用于:凝膠成像系統(tǒng)可用于蛋白質(zhì)、核酸、多肽、氨基酸、聚氨基酸等生物分子的分離純化結(jié)果的定性分析。 分子量定量。對于常用的DNA膜，利用分子量量化功能在膠上標(biāo)注DNA Marker條帶的已知分子量，自動生成擬合曲線，并以此測量未知條帶的分子量。用這種方法得到的結(jié)果比肉眼估計(jì)的結(jié)果要準(zhǔn)確得多。 定量密度。測定DNA和RNA濃度常用的方法是紫外吸收法，但只能測定樣品中總核苷酸濃度，不能區(qū)分不同長度片段的濃度。利用凝膠成像系統(tǒng)和軟件，先標(biāo)定DNA膠片上某個(gè)已知DNA含量的標(biāo)準(zhǔn)條帶的密度，然后方便點(diǎn)擊其他未知條帶，通過與已知條帶的密度對比，即可得到未知DNA含量。該方法也適用于測定PAGE蛋白膠帶的濃度。 密度掃描。在分子生物學(xué)和生物工程的研究中，常用的方法是計(jì)算蛋白質(zhì)表達(dá)產(chǎn)物在整個(gè)細(xì)菌蛋白質(zhì)中的百分比。傳統(tǒng)的方法是使用特殊的密度掃描，但這項(xiàng)工作可以通過使用生物分析軟件結(jié)合實(shí)驗(yàn)室常規(guī)掃描儀直接照射的凝膠成像系統(tǒng)來完成。 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)定量。PCR定量主要是指如果PCR實(shí)驗(yàn)擴(kuò)增出多個(gè)目的條帶，可以通過軟件計(jì)算出每個(gè)條帶占總條帶的相對百分比。就這個(gè)功能而言，和密度掃描類似，但實(shí)際上原理不同。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)定量是量化選定條帶的相對密度，并計(jì)算它們在總和中的百分比。在密度掃描期間，為選定區(qū)域生成縱向掃描曲線并進(jìn)行積分。